Come Denaturare una Proteina: 7 Passaggi (Illustrato)

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Come Denaturare una Proteina: 7 Passaggi (Illustrato)
Come Denaturare una Proteina: 7 Passaggi (Illustrato)

Video: Come Denaturare una Proteina: 7 Passaggi (Illustrato)

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Forse vuoi denaturare una proteina per un progetto scientifico, o forse hai letto del cibo denaturato e vuoi sapere come funziona. La denaturazione è il processo mediante il quale una proteina perde la sua forma e struttura a causa di azioni di forze esterne, inclusi calore, radiazioni, acidi e solventi. I solventi organici di solito denaturano le proteine. Il modo esatto in cui denaturare una proteina dipende da quella particolare con cui si desidera lavorare, poiché richiedono agenti denaturanti diversi a livelli diversi. La maggior parte delle proteine può essere denaturata, però, se sai cosa cambiare nell'ambiente della proteina.

Passi

Metodo 1 di 2: denaturare una proteina

Denaturare una proteina Passaggio 1
Denaturare una proteina Passaggio 1

Passaggio 1. Usa il calore

Il calore è uno dei modi più semplici e più comuni per denaturare una proteina. Quando la proteina in questione è presente nel cibo, la semplice cottura del cibo denatura le proteine. Molte proteine possono essere denaturate esponendole a una temperatura pari o superiore a 100° C (212° F). Ciò consente alle proteine di coagulare e di ridurre la loro solubilità.

La durata dell'esposizione dipende da cosa si sta esponendo al calore. Un uovo, ad esempio, può cuocere in padella a fuoco medio in cinque minuti, mentre un arrosto può impiegare ore per cuocere in forno

Denaturare una proteina Passaggio 2
Denaturare una proteina Passaggio 2

Passaggio 2. Applicare alcol

L'alcol interrompe i legami idrogeno che si verificano tra i gruppi ammidici di un legame peptidico. Quando una proteina è esposta a una soluzione alcolica, le molecole alcoliche formano nuovi legami con la catena proteica. Utilizzare una soluzione al 70% di alcol per sfondare la parete cellulare dei batteri e denaturare la proteina.

Gli alcoli concentrati possono essere pericolosi, poiché sono sia infiammabili che tossici. Indossare sempre l'equipaggiamento di sicurezza completo, compresi guanti e protezione per gli occhi, e maneggiare in un ambiente sicuro ea temperatura controllata

Denaturare una proteina Passaggio 3
Denaturare una proteina Passaggio 3

Passaggio 3. Modificare il pH

La struttura interna di una proteina può essere scomposta quando il suo ambiente è molto acido o molto alcalino, poiché interrompono i legami ionici che tengono insieme i ponti salini della proteina. Aggiungi una soluzione acida o basica alla proteina. L'ambiente circostante dovrebbe avere un pH superiore a 10 o inferiore a 4 per favorire la denaturazione. Se stai inducendo il cambiamento con l'acido, il pH dovrebbe essere compreso tra 2 e 5.

La modifica del pH può ionizzare un amminoacido, a seconda del pKa di ciascun gruppo funzionale in quell'amminoacido. Puoi anche ionizzare il gruppo amminico o il gruppo carbossilico presente nell'amminoacido

Denaturare una proteina Passaggio 4
Denaturare una proteina Passaggio 4

Passaggio 4. Prova i sali di metalli pesanti

I metalli pesanti possono interrompere i legami nella proteina, facendole perdere la sua struttura. I sali di metalli pesanti come il mercurio e il piombo possono essere usati per denaturare diverse proteine. Tali sali sono disponibili presso la maggior parte dei fornitori di sostanze chimiche e devono essere sempre utilizzati con cautela e con un'adeguata attrezzatura di sicurezza, inclusi guanti e protezione per gli occhi.

I metalli pesanti possono interagire con i gruppi funzionali della catena laterale di una proteina per formare complessi. I metalli pesanti ossidano anche le catene laterali degli aminoacidi della proteina

Metodo 2 di 2: Rinaturazione delle proteine

Denaturare una proteina Passaggio 5
Denaturare una proteina Passaggio 5

Passaggio 1. Determinare se una proteina può ripiegarsi

Alcune forme di denaturazione sono permanenti, mentre altre possono essere annullate. La cottura di un uovo o di una carne, ad esempio, non può essere annullata, ma una proteina che è stata esposta a un pH elevato può riprendere forma se messa in un ambiente più neutro.

Se la proteina può ripiegarsi o meno dipenderà dal suo DNA. Il DNA conterrà le informazioni necessarie affinché la proteina ritorni al suo stato originario

Denaturare una proteina Passaggio 6
Denaturare una proteina Passaggio 6

Passaggio 2. Rimuovere il fattore di denaturazione

Riportare in stasi l'ambiente intorno alla proteina e rimuovere l'elemento denaturante. Rimuovere l'acido o la base, ad esempio, o riportare la proteina a una temperatura più ragionevole.

Denaturare una proteina Passaggio 7
Denaturare una proteina Passaggio 7

Passaggio 3. Utilizzare un kit di rinaturazione

Molte aziende di forniture di laboratorio vendono kit di rinaturazione che consentono di selezionare i parametri migliori per incoraggiare la rinaturazione. Tali kit possono essere particolarmente utili se stai osservando le proteine in un ambiente di laboratorio o sperimentale.

Suggerimenti

  • Una proteina denaturata perde la sua struttura quaternaria, terziaria e secondaria che è evidente nel suo stato nativo, ma la sua struttura primaria rimarrà.
  • Una proteina denaturata perde anche parte della sua bioattività, in alcuni casi, come con gli enzimi, perdendo la sua capacità di funzionare. Ad esempio, i substrati potrebbero non essere più in grado di legarsi agli enzimi che sono stati denaturati.
  • La proteina denaturata può perdere la sua solubilità in una soluzione.
  • Puoi anche denaturare gli acidi nucleici usando tecniche di laboratorio per separare i filamenti.

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